这些缓冲液可用于接近中性pH的生物应用
磷酸的三个pKa值（来自CRC化学和物理手册）为2.16,7.21和12.32。 如此处所示，磷酸一钠及其共轭碱，磷酸二钠通常用于生成pH值约为7的缓冲液，用于生物应用。
制作这个缓冲区比制作TAE和TBE缓冲区要困难一些。 然而，这并不是非常困难。 简单的平均。 它应该需要大约10分钟鞭打这个缓冲区。 就是这样。
1.确定缓冲区属性
在制作缓冲液之前，您应该先了解您想要的摩尔浓度，制备的体积以及所需的pH值。 大多数缓冲液在0.1M和10M之间的浓度下效果最好。pH应该在酸/缀合物碱pKa的1pH单位内。 为了简单起见，此示例计算将用于1升缓冲液。
2.确定酸与碱的比例
使用Henderson-Hasselbalch公式（如下）来确定制作所需pH值的缓冲液所需的酸碱比。 使用最接近所需pH值的pKa值，该比例将指与pKa相对应的酸碱共轭对。
HH等式：pH = pKa + log（[碱] / [酸]）
对于pH 6.9的缓冲液，[碱] / [酸] = 0.4898
替代[Acid]并解决[Base]
所需的缓冲剂的摩尔浓度是[酸] + [碱]的总和。
对于1M缓冲液，[碱] + [酸] = 1和[碱] = 1- [酸]
通过将它代入比例公式，从第2步开始：
[酸] = 0.6712摩尔/升
解决[Acid]
使用公式：[Base] = 1 - [Acid]，可以计算出：
[基] = 0.3288摩尔/升
3.混合酸和共轭碱
使用Henderson-Hasselbalch方程计算缓冲液所需的酸碱比例后，使用正确量的磷酸一钠和磷酸二钠，准备1升以下的溶液。
4.检查pH值
使用pH探头确认缓冲液的正确pH值。 如有必要，使用磷酸或氢氧化钠（NaOH）稍微调整。
5.更正音量
一旦达到所需的pH值，将缓冲液的体积调至1升。 然后根据需要稀释缓冲液。 可以将该相同的缓冲液稀释以产生0.5M，0.1M，0.05M或任何两者之间的任何缓冲液。
6.缓冲区提示
请记住，pKa不容易测量到一个确切的值。 来自不同来源的文献中可能存在略微不同的值。
7.你需要什么
为了制作缓冲液，你需要三种物质，其余的材料是设备。 这些物质是磷酸一钠，磷酸二钠和磷酸或氢氧化钠以调节pH。
您还需要一台pH计和探头以及适当的实验室器具。 这包括容量瓶，刻度量筒，烧杯和搅拌棒。
最后，你需要一个搅拌电炉。