在用凝胶电泳分离材料后,有几种不同的染色剂可用于可视化和拍摄DNA 。 在许多选择中,这五种菌株是使用最广泛的溴化乙锭最常见的开始。 在处理这个过程时,重要的是不仅要了解菌株之间的差异,还要知道固有的健康风险。
01溴化乙锭
溴化乙锭很可能是用于可视化DNA的最着名的染料。 该染料可以用于凝胶混合物, 电泳缓冲液中或在运行后染色凝胶。 染料的分子粘附在DNA链上,并在紫外线下发出荧光,从而准确显示出凝胶中带的位置。 尽管有其优点,但缺点是溴化乙锭是一种潜在的致癌物质,所以必须小心处理。 由于使用这种凝胶的潜在健康风险,已找到替代品。 02 SYBR黄金
SYBR Gold染料可用于染色双链或单链DNA,或染色RNA。 SYBR Gold是溴化乙锭首次进入市场的替代品之一,它被认为比溴化乙锭更敏感。 一旦染料与核酸结合,该染料展现出1000倍的紫外荧光。 然后它可以穿透厚而高百分比的琼脂糖凝胶,并可用于甲醛凝胶。 由于未结合分子的荧光很低,所以不需要脱色。 许可证持有人Molecular Probes(自推出SYBR Gold以来)开发并销售了更安全的溴化乙锭替代品SYBR Safe和SYBR Green。
03 SYBR Green
SYBR Green I和II染色剂(再次由Molecular Probes销售)针对不同目的进行了优化。 因为它们与DNA结合,它们仍然被认为是潜在的诱变剂,因此应该小心处理它们。 SYBR Green I对双链DNA更敏感,而SYBR Green II则最适合与单链DNA或RNA一起使用。 像流行的溴化乙锭染色剂一样,这些高度敏感的污渍在紫外线下发出荧光。 04 SYBR安全
SYBR Safe的设计是为了更安全地替代溴化乙锭和其他SYBR染色剂。 它不被视为有害废物,通常可以通过常规下水道系统(即下水道)进行处理,因为毒性测试表明没有急性毒性。 测试还表明,叙利亚仓鼠胚胎(SHE)细胞,人淋巴细胞,小鼠淋巴瘤细胞和AMES测试中几乎没有遗传毒性。 该染色剂可以与蓝光透照器一起使用,对可视化的DNA造成较小的损伤,并且为以后的克隆提供更好的效率。 05伊娃格林
Eva Green是一种绿色荧光染料,与其他染料相比,已被发现可抑制PCR的程度较低。 这对于定量实时PCR等应用非常有用。 如果您使用低熔点凝胶回收DNA,这也是一个不错的选择。 它在高温下非常稳定,自身荧光很低,但与DNA结合时荧光很强。 伊娃格林也被证明具有非常低或没有细胞毒性或致突变性。