如何在3个简单步骤中制作TBE缓冲液

该缓冲液用于DNA的电泳分离

TBE缓冲液是由Tris碱,硼酸和EDTA(或Tris-硼酸盐-EDTA)组成的缓冲溶液。 该缓冲液通常用于琼脂糖凝胶电泳分析由PCR扩增,DNA纯化方案或DNA克隆实验产生的DNA产物。

TBE缓冲液对于分离较小的DNA片段(MW <1000)特别有用,例如限制酶消化的小产物。

TBE具有更大的缓冲能力,并且会比TAE缓冲区提供更清晰的分辨率。 TAE缓冲液是由Tris碱,乙酸和EDTA(Tris-acetate-EDTA)组成的溶液。

TBE通常比TAE更昂贵并且抑制DNA连接酶,如果想要进行随后的DNA纯化和连接步骤,这可能会导致问题。 通过以下三个简单步骤,了解如何制作TBE缓冲区。 创建此缓冲区不应超过约30分钟。 就是这样:

准备EDTA储液

应提前准备EDTA(乙二胺四乙酸)溶液。 在pH调节到约8.0之前,EDTA不会完全溶解到溶液中。 对于500毫升0.5M EDTA的储备溶液,称量93.05克EDTA二钠盐(FW = 372.2)。 然后将其溶于400毫升去离子水中并用NaOH调节pH值。 之后,将解决方案加到最终量为500毫升。

准备TBE的库存解决方案

通过称量54g Tris碱(FW = 121.14)和27.5g硼酸(FW = 61.83)制备TBE的浓缩(5x)储备溶液并将其溶解在大约900mL去离子水中。 然后加入20毫升0.5M EDTA(pH8.0)并将溶液调节至最终体积1升。

该溶液可以在室温下储存,但在较老的溶液中会形成沉淀。 将缓冲液保存在玻璃瓶中,如果沉淀物已经形成,则丢弃。

准备TBE的工作解决方案

对于琼脂糖凝胶电泳,可以以0.5x的浓度(浓缩物的1:10稀释)使用TBE缓冲液。 在去离子水中将原液稀释10倍。 最终溶质浓度是45mM Tris-硼酸盐和1mM EDTA。 缓冲液现在可用于运行琼脂糖凝胶

你需要什么

为了制造TBE缓冲液,您只需要四种物质。 这个清单上的其余项目是设备。 所需的四种物质是EDTA二钠盐,Tris碱,硼酸和去离子水。

至于设备,您需要适当的pH计和校准标准。 除此之外,你需要600毫升和1500毫升烧杯或烧瓶。 四舍五入您的设备需求是量筒,搅拌棒和搅拌盘。

检查您将要使用的实验室的清单,以确保您在开始之前拥有所需的一切。 没有什么比在准备解决方案的过程中不得不停下来更糟了,因为你已经用完了适当的材料。

如果您的实验室在学校或工作场所,请与适当的人员核对,以确定他们拥有库存中的所有物品。 这样做可能会最终为您节省时间和精力。