什么载体必须做与基因和克隆
在分子克隆中,载体是用作将外源基因转移或插入另一个细胞中的载体的DNA分子,其可以在其中复制和/或表达。 载体是基因克隆的基本工具之一,如果它们也编码某种编码生物指示剂分子的标记基因,这些基因可以在生物评估中测量以确保它们在宿主生物体中的插入和表达,则它们是最有用的。
具体而言,克隆载体是从病毒,质粒或高等生物体细胞中提取的DNA,插入外源DNA片段用于克隆目的。 由于克隆载体可以稳定地保持在生物体中,所以载体还包含允许方便插入或去除DNA的特征。 克隆到克隆载体中后,可将DNA片段进一步亚克隆到另一个可以更特异性使用的载体中。
在某些情况下,病毒被用来感染细菌。 这些病毒简称为噬菌体或噬菌体。 逆转录病毒是将基因导入动物细胞的优良载体。 质粒是DNA的圆形片段,是用于将外源DNA导入细菌细胞的最常用载体。 它们通常携带抗生素抗性基因,可用于测试质粒DNA在抗生素培养皿上的表达。
通常使用土壤细菌根癌土壤杆菌( Agrobacterium tumefaciens)进行基因转移进入植物细胞,所述土壤根瘤土壤杆菌作为载体并将大质粒插入宿主细胞中。 只有含有克隆载体的细胞在存在抗生素时才会生长。
克隆载体的主要类型
六种主要类型的载体是:
- 质粒。 在细菌细胞内自主复制的环状染色体外DNA。 质粒通常具有高拷贝数,如pUC19,其拷贝数为每个细胞500-700个拷贝。
- 噬菌体。 线性DNA分子来源于噬菌体λ。 可以用外源DNA取代而不会中断其生命周期。
- 粘粒。 另一种结合质粒和噬菌体特征的环状染色体外DNA分子。
- 细菌人工染色体。 基于细菌微型F质粒。
- 酵母人工染色体。 这是一种人造染色体,它含有复制起点,酵母着丝粒(连接姊妹染色单体或二联体的染色体的一部分)和选择性标记的端粒(在细胞分裂过程中被切断的染色体末端的一次性缓冲液)用于在酵母细胞中鉴定。
人类人造染色体。 这种类型的矢量是 潜在地用于基因递送到人类细胞中,以及用于表达研究和确定人类染色体功能的工具。 它可以携带非常大的DNA片段。
所有工程载体都有复制起点(复制子),克隆位点(位于插入外源DNA既不会破坏重要标记的复制或失活),也包含选择性标记(通常是提供对抗生素的抗性的基因)。