冻干或冷冻干燥是一个简短的实验室程序
冻干基础知识
长时间储存细菌,真菌,酵母或其他微生物培养物的最佳方法之一是使用冷冻干燥过程。 这个简短的实验室程序可以用任何商业上可用的冷冻干燥机进行,这将保留您的培养物收集。 因为冻干是最复杂和最昂贵的干燥形式,所以这个过程通常局限于具有高价值的微妙的热敏材料。 通常不冻结的物质通常可以冻干,因此冷藏是不必要的。
这个过程可能需要三个小时,长达24小时,不包括文化的发展时间。
冻干的分步过程
首先,在LB或其他适当的营养琼脂平板上培养微生物的过夜培养物或草坪。
接下来,提前通过高压灭菌处理来制备无菌压盖瓶,并将瓶盖(橡胶塞)松散地放置在顶部。 高压灭菌前,将带有培养物标识的纸张标签放在试管内。 或者,使用设计用于无菌的帽子 。
加入4mL冻干缓冲液到平板上。 如有必要,细胞可以使用无菌玻璃棒悬浮。
将培养悬浮液快速转移到灭菌小瓶中。 每瓶约增加1.5 mL。 用橡皮帽密封。
通过将小瓶置于-20摄氏度的冷冻箱中来冷冻小瓶内的培养悬浮液。
一旦培养物冷冻,通过开启冷冻干燥机并准备适当的温度和真空条件以保持稳定。 根据制造商对您使用的特定品牌的冷冻干燥机的说明进行操作。
小心地和无菌地将小瓶盖松散地放在小瓶顶部,以便在冷冻干燥过程中水分可以逸出,并将小瓶放入冷冻干燥室中。 根据制造商的说明将真空施加到腔室。
让培养时间完全冻干(干燥)。 根据每个样品的体积和您拥有的样品数量,这可能需要几个小时甚至一夜之间。
根据制造商的说明从冷冻干燥室中取出样品,立即用橡皮帽密封小瓶,然后将瓶盖密封。
将冻干的培养物收集物在室温下保存。
你需要的产品
- 冷冻干燥机
- 营养素或其他适当的琼脂平板(和培养箱培养)
- 玻璃棒
- 冻干缓冲液
- 带橡胶塞的压接式小瓶(以及用于盖帽的压接器)
- 冰箱
参考:
SP Scientific。 冷冻干燥的基本原理。 http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/