如何冷冻干燥细菌培养(冻干)

冻干或冷冻干燥是一个简短的实验室程序

冷冻干燥(也称为冷冻干燥冷冻干燥)是在产品冷冻(然后置于真空下)后从产品中除去水分的过程,允许冰块从固体变成蒸气,而不经过液相。 通过升华过程从产品中除去冰(或其他冷冻溶剂),并通过解吸过程去除结合的水分子。

冻干基础知识

长时间储存​​细菌,真菌,酵母或其他微生物培养物的最佳方法之一是使用冷冻干燥过程。 这个简短的实验室程序可以用任何商业上可用的冷冻干燥机进行,这将保留您的培养物收集。 因为冻干是最复杂和最昂贵的干燥形式,所以这个过程通常局限于具有高价值的微妙的热敏材料。 通常不冻结的物质通常可以冻干,因此冷藏是不必要的。

这个过程可能需要三个小时,长达24小时,不包括文化的发展时间。

冻干的分步过程

  1. 首先,在LB或其他适当的营养琼脂平板上培养微生物的过夜培养物或草坪。

  2. 接下来,提前通过高压灭菌处理来制备无菌压盖瓶,并将瓶盖(橡胶塞)松散地放置在顶部。 高压灭菌前,将带有培养物标识的纸张标签放在试管内。 或者,使用设计用于无菌的帽子

  1. 加入4mL冻干缓冲液到平板上。 如有必要,细胞可以使用无菌玻璃棒悬浮。

  2. 将培养悬浮液快速转移到灭菌小瓶中。 每瓶约增加1.5 mL。 用橡皮帽密封。

  3. 通过将小瓶置于-20摄氏度的冷冻箱中来冷冻小瓶内的培养悬浮液。

  1. 一旦培养物冷冻,通过开启冷冻干燥机并准备适当的温度和真空条件以保持稳定。 根据制造商对您使用的特定品牌的冷冻干燥机的说明进行操作。

  2. 小心地和无菌地将小瓶盖松散地放在小瓶顶部,以便在冷冻干燥过程中水分可以逸出,并将小瓶放入冷冻干燥室中。 根据制造商的说明将真空施加到腔室。

  3. 让培养时间完全冻干(干燥)。 根据每个样品的体积和您拥有的样品数量,这可能需要几个小时甚至一夜之间。

  4. 根据制造商的说明从冷冻干燥室中取出样品,立即用橡皮帽密封小瓶,然后将瓶盖密封。

  5. 将冻干的培养物收集物在室温下保存。

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参考:

SP Scientific。 冷冻干燥的基本原理。 http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/